熒光顯微鏡用于研究化學(xué)物質(zhì)在細(xì)胞中的吸收、運(yùn)輸、分布和定位。被測物體產(chǎn)生熒光有兩種形式：自發(fā)光。紫外線照射后直接發(fā)出的熒光稱為二次熒光。經(jīng)過熒光染料處理和紫外線照射后，可以發(fā)出熒光。細(xì)胞中的一些物質(zhì)，如葉綠素，在紫外線照射后會產(chǎn)生自發(fā)光。雖然其他物質(zhì)本身沒有熒光，但它們可以通過熒光染料或熒光抗體染色發(fā)出二次熒光。
熒光顯微鏡選擇發(fā)光效率高的點光源，發(fā)射一定波長的光(紫外線365nm或紫藍(lán)光420nm)作為一種激發(fā)光，它會激發(fā)標(biāo)本中的熒光物質(zhì)，發(fā)出各種顏色的半透明光，然后通過物鏡和目鏡的放大來觀察。在如此強(qiáng)烈的對比環(huán)境中，即使半透明光很弱，也很容易識別，并且具有很高的靈敏度。它主要用于研究細(xì)胞結(jié)構(gòu)、功能和化學(xué)成分。
熒光顯微鏡可分為散射顯微鏡和下降顯微鏡兩種類型。前者是原始的，后者是先進(jìn)的。兩種熒光顯微鏡的基本結(jié)構(gòu)相似，主要區(qū)別如下：散射激發(fā)光通過標(biāo)本，整個標(biāo)本產(chǎn)生光，然后進(jìn)入物鏡，放大率越大，光越弱;入射激發(fā)光投射到樣品表面，樣品表面產(chǎn)生光，然后光進(jìn)入物鏡。放大率越大，光線越高，適合高倍數(shù)觀察。
熒光顯微鏡的主要部件包括汞燈源、興奮過濾器、分色鏡(脫落)、抑制過濾器、暗場聚光燈(散射)等。此外，由于汞燈的嚴(yán)重加熱，其中大多數(shù)都配備了吸熱過濾器。一些熒光顯微鏡也有相位差鏡和環(huán)狀闌尾，因此可以觀察到相位差。熒光顯微鏡選擇倒置框架、倒置顯微鏡等。
此外，上述所有顯微鏡有顯微鏡CCD組裝成數(shù)字顯微鏡，將顯微鏡看到的物理圖像轉(zhuǎn)換成數(shù)字圖像，并在計算機(jī)上顯示圖像。因此，我們可以通過傳統(tǒng)的雙眼觀察和顯示屏上的再現(xiàn)來研究微領(lǐng)域，從而提高工作效率。
在金相顯微鏡的使用過程中，想要觀察到金屬破壞的斷口就要磨平，拋光并且加化學(xué)藥水酸洗之后才能看到。
一、過程： 簡單地說分為:取樣→鑲嵌→磨光與拋光→侵蝕→觀察照相等五個步驟。
二、注意事項：
a) 金相試片只應(yīng)在砂輪側(cè)面輕輕地磨制。當(dāng)試片的厚度小于10mm 時，應(yīng)在鑲嵌后再進(jìn)行打磨。
b) 嚴(yán)禁在磨片機(jī)旋轉(zhuǎn)時更換砂紙、砂布。
c ) 試片打磨，拋光時應(yīng)拿緊，并力求與磨面接觸平穩(wěn)。兩人不得同時在一個旋轉(zhuǎn)盤上操作。
d) 腐蝕、電解金相試片的化學(xué)藥品試劑應(yīng)按其性質(zhì)分類儲存和保管，配制、使用時應(yīng)遵守有關(guān)規(guī)定；進(jìn)行電解時，應(yīng)嚴(yán)格控制電解液的溫度及電流密度。
e) 金相腐蝕、電解的操作室應(yīng)通風(fēng)良好，并設(shè)有自來水和急救酸、堿傷害時中和用的溶液。
f) 金相試驗用過的廢液應(yīng)經(jīng)必要的處理后方可排放，不得將未經(jīng)處理的廢料倒入下水道。
g) 現(xiàn)場進(jìn)行金相試驗時應(yīng)有防止試劑、溶液潑灑滴落的措施；作業(yè)完畢后應(yīng)將雜物、廢液清理干凈。
h) 更換臥式金相顯微鏡的弧光電極時要切斷電源。
①在使用光學(xué)顯微鏡時，先留意顯微鏡總體安裝是不是有松脫，例如，光學(xué)顯微鏡長期被使用，將會形成支撐架松脫、物鏡安裝太松等難題。那樣太松會危害檢驗實踐效果，還十分容易破壞光學(xué)顯微鏡。
②運(yùn)用準(zhǔn)焦螺旋的常見問題。在操作過程全過程中十分容易在高倍鏡下立刻對焦，或是無論鏡筒升高或降低，雙眼自始至終在往目鏡中看視野，或是不是控制物距的臨界點，物距調(diào)到２～３公分時還要往上漲，并且旋轉(zhuǎn)準(zhǔn)焦螺旋式的速率疾速。這種難題都十分容易形成成物鏡攝像鏡頭惡感到裝片，損傷裝片或攝像鏡頭。關(guān)于之上實踐操作難題，小編想說，在調(diào)整鏡頭焦距時一定要在低倍鏡降落，先旋轉(zhuǎn)粗準(zhǔn)焦螺旋，使鏡筒慢慢地降低，物鏡挨近蓋玻片，但留意不用讓物鏡遇到蓋玻片，在這個全過程中雙眼要從側(cè)邊看物鏡，隨后用右眼朝目鏡內(nèi)注視，并慢慢地反方向調(diào)整粗準(zhǔn)焦螺旋，使鏡筒冉冉上升，直至見到虛像才行，另外向?qū)W員標(biāo)明普通光學(xué)顯微鏡的物距在１公分上下，因而假設(shè)物距已遠(yuǎn)遠(yuǎn)超越１公分，但并未見到虛像，那可能是標(biāo)本采集未在視野內(nèi)或旋轉(zhuǎn)粗準(zhǔn)焦螺旋速率過快，這時應(yīng)調(diào)理裝片部位，隨后再重復(fù)所述流程，當(dāng)視野中出現(xiàn)含糊不清的虛像時，就需求換用細(xì)準(zhǔn)焦螺旋調(diào)整，只能那樣，才能夠變小找尋范疇，提升尋覓虛像的速率。
③光學(xué)顯微鏡對光線的難題。對光線是應(yīng)用光學(xué)顯微鏡時很重要的一步，謹(jǐn)記，一定要用低倍鏡對光線，當(dāng)光源較強(qiáng)時用小焦距、平面鏡，而光源較差的時分用大光圈鏡頭、凹面鏡，旋轉(zhuǎn)后視鏡時不能用一只手就將后視鏡扳出來，要用兩手旋轉(zhuǎn)，當(dāng)見到勻稱亮堂的環(huán)形視野才行。光對好后千萬別隨意移動光學(xué)顯微鏡，以防光源不能夠**地依據(jù)后視鏡進(jìn)到通光線的孔子。
④物鏡變換的難題。應(yīng)用低倍鏡后改用高倍鏡，大家通常喜歡用手指立刻推轉(zhuǎn)物鏡，覺得那樣較為省勁，但那樣十分容易使物鏡的光軸產(chǎn)生傾斜，原因是轉(zhuǎn)化器的原資料色澤過軟，精細(xì)度較高，外螺紋支承不勻稱十分容易松動。一旦外螺紋破壞，全部轉(zhuǎn)化器便會報費(fèi)。因此小編建議大家手握著轉(zhuǎn)化器的下一層旋轉(zhuǎn)板變換物鏡。
⑤高倍光學(xué)顯微鏡用眼的難題。用高倍顯微鏡物鏡時，右眼要盡可能接近目鏡，右眼嘗試向視野內(nèi)注視，不要用力捂著右眼或果斷閉上右眼，它是不符實驗的觀查規(guī)則的，常常那樣右眼容易疲倦，另外也不能夠保證邊觀查邊繪圖。
視頻顯微鏡的聚光器也叫集光器，由聚光鏡和可變光闌組成。聚光鏡由一片或數(shù)片透鏡組成，其作用相當(dāng)于凸透鏡，起聚光的作用，以增強(qiáng)射入物鏡的光線。可變光闌也叫光圈，位于聚光鏡的下方，由十幾片金屬薄片組成，中心部呈圓孔。推動可變光闌的把手可以任意調(diào)節(jié)孔徑的大小，其作用是通過調(diào)節(jié)光強(qiáng)度，使聚光鏡的數(shù)值孔徑和物鏡的數(shù)值孔徑相一致。可變光闌開得越大，則數(shù)值孔徑越大；反之，則數(shù)值孔徑越小。
視頻顯微鏡的反光鏡一般裝在聚光器下方的鏡座上，可以在水平和直方向任意旋轉(zhuǎn)。它的一面是平面鏡，另一面是凹面鏡，其作用是使光源發(fā)出的光或自然光射向聚光鏡。光強(qiáng)時用平面鏡，光弱時用凹面鏡。有的顯微鏡的人工光源安裝在鏡座內(nèi)，其反光鏡也固定在鏡座內(nèi)。
由單透鏡構(gòu)成的放大鏡和由透鏡組成的實體顯微鏡(解剖鏡)稱單式顯微鏡生物學(xué)教學(xué)及科研所用的光學(xué)顯微鏡一般是復(fù)式顯微鏡。
由外界入射的光線經(jīng)反光鏡反射向上，或由內(nèi)光源發(fā)射的光線經(jīng)集光鏡向上，再經(jīng)聚光鏡會聚在被檢標(biāo)本上，使標(biāo)本得到足夠的照明，由標(biāo)本反射或折射出的光線經(jīng)物鏡進(jìn)入使光軸與水平面傾斜45
度角的棱鏡，在目鏡的焦平面上，即在目鏡的視場光闌處，成放大的側(cè)光實像，該實像再經(jīng)目鏡的接目透鏡放大成虛像，所以人們看到的是虛像。
被檢物體經(jīng)顯微鏡的物鏡和目鏡放大后的總放大倍數(shù)是物鏡的放大倍數(shù)和目鏡放大倍數(shù)的乘積。如用放大40倍的物鏡和放大10倍的目鏡的總放大倍數(shù)是400倍。
當(dāng)視頻顯微鏡放大倍數(shù)增加時，一方面由于放大倍數(shù)越高，透鏡數(shù)目越多，被透鏡吸收的光線也越多;另一方面由于視場(指的是所能看到被檢標(biāo)本的范圍)的亮度與放大倍數(shù)的平方成反比，即放大倍數(shù)越高，視場越暗。為了得到足夠的亮度，必須安裝聚光器，把光線集中到所要觀察的標(biāo)本上。
觀察時視頻顯微鏡的聚光器該處的高度
觀察時，要保證得到*好的觀察效果，聚光器的聚光焦點應(yīng)正好落在標(biāo)本上。要實現(xiàn)這個條件，就必須調(diào)節(jié)聚光器的高度。當(dāng)用平行光照明時，聚光器的聚光焦點是在它上端透鏡平面中心上方約1.25mm之處，因此，人們常常要求在觀察時將聚光器上升到它上端透鏡平面僅稍稍低于載物臺平面的高度，這樣聚光焦點就可能落到位于標(biāo)準(zhǔn)厚度載玻片上的標(biāo)本上。當(dāng)使用比標(biāo)準(zhǔn)厚度薄的載玻片來承放標(biāo)本時，聚光器的位置要相應(yīng)地降低一些，而當(dāng)使用過厚地載玻片時，聚光焦點只能落在標(biāo)本下方，不利于精細(xì)的觀察。
視頻顯微鏡的聚光器應(yīng)與物鏡配合使用
這里所謂的配合，指的就是使視頻顯微鏡的聚光器和物鏡這兩者的數(shù)值孔徑取得一致，以更好的進(jìn)行較為精細(xì)的觀察。假如聚光器的數(shù)值孔徑低于物鏡，那物鏡的部分?jǐn)?shù)值孔徑就浪費(fèi)了，從而達(dá)不到它的*高分辨率。假如把聚光器的數(shù)值孔徑大于物鏡的數(shù)值孔徑，則一方面不能提高物鏡的規(guī)定分辨力，另一方面反會由于照明光束過寬，使物象的清晰度下降。聚光器與物鏡配合的操作方法是：在完成照明、調(diào)焦操作后，取下目鏡直接向鏡筒中看，把聚光器下的可變光闌關(guān)到*小，再慢慢地開大。開到它的口徑與所見視場的直徑恰好一樣大，然后按上目鏡，即可進(jìn)行觀察。每轉(zhuǎn)換一次物鏡，都要隨著進(jìn)行依次這樣的配合操作。有的聚光器可變光闌的邊框上刻有表示開啟口徑的尺度，可以根據(jù)刻度來進(jìn)行配合。
在顯微鏡光源故障維修中，發(fā)現(xiàn)其中有一部分用戶(約25%)因?qū)︼@微鏡光源系統(tǒng)缺乏了解，把本可以自己解決光源故障的顯微鏡，從很遠(yuǎn)的地方送來或寄到單位維修。不僅費(fèi)時，而且費(fèi)力、費(fèi)錢。為了讓這部分顯微鏡使用用戶，不再跑冤枉路、花冤枉錢，先向大家介紹一下遇到顯微鏡光源故障時的維修方法：
1、檢查燈泡是否燒壞。約10%的用戶因有些燈絲燒壞肉眼很難辨別而把顯微鏡拿來廠家修理。
2、檢查保險絲是否燒壞。約5%的用戶因有些保險絲燒斷后很難用肉眼判別而退到修理。正確檢查方法是用萬用表電阻檔檢測保險絲是否良好
3、檢查顯微鏡燈泡插座是否因溫度高表面氧化而造成接觸不良。約7%的用戶因燈泡插座表面氧化而把顯微鏡拿來修理，正確的檢查方法是取下燈泡，用細(xì)沙紙或者小刀片打磨刮去燈座表面的氧化層，然后裝回?zé)襞輽z查燈座是否接觸良好。
4、檢查電源插座接觸是否良好。約3%的用戶把光源沒有問題的顯微鏡拿來廠家維修，結(jié)果在插上電源，顯微鏡光源正常。
在使用顯微鏡時首先應(yīng)該考慮的是你需要觀察什么內(nèi)容，希望得到什么觀察/拍攝效果，然后才能決定采用什么類型的顯微鏡。如果想達(dá)到*理想的明視野顯微鏡的效果指顯微鏡應(yīng)達(dá)到的*佳分辨率)而顯微鏡上用的卻是消色差或相差物鏡，或所使用的聚光器的數(shù)值孔徑只有1.2(阿貝聚光器)那么無論怎樣努力，也不可能拍出*好的照片(指用油鏡工作時)。
所以，拍攝前應(yīng)檢查確定所使用的顯微鏡類型及組件是否匹配，調(diào)整方法是否正確，這是至關(guān)重要的，一般來講，確定所使用的顯微鏡方法是否正確，應(yīng)先看物鏡的類型，再查聚光器用的是否正確，然后再核實是否符合柯勒照明條件。
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