光學顯微鏡作為精密光學儀器，其操作規范性直接影響成像質量、設備壽命及用戶安全。本文結合顯微鏡的工作原理與實驗室管理標準，系統梳理日常操作的核心規范，涵蓋使用前準備、操作流程、維護保養及安全注意事項四大模塊。
一、使用前準備：奠定規范操作基礎
環境檢查
溫濕度控制：確保室溫20±2℃、濕度<60%，避免光學部件霉變或機械部件熱脹冷縮。
防震隔離：將顯微鏡置于專用防震臺或橡膠減震墊上，隔離外部振動（如人員走動、設備運行）。
清潔度要求：操作區域空氣潔凈度應達ISO 14644-1標準Class 7（≥0.5μm顆粒物≤352000個/m3），減少灰塵沉積。
設備狀態確認
外觀檢查：
目鏡、物鏡鏡片無劃痕、指紋或污漬（必要時用長纖維棉簽蘸取無水乙醇輕擦）。
載物臺、調焦機構無異物卡滯，光源亮度可調（LED光源需預熱10分鐘穩定）。
功能測試：
開啟電源，驗證光源、電動調焦（如配備）、熒光模塊（如配備）等功能正常。
檢查物鏡轉換器旋轉靈活性，確保物鏡切換無卡頓。
樣本制備
蓋玻片使用：液態樣本（如細胞懸液）B須使用蓋玻片（厚度0.17mm），避免物鏡直接接觸液體。
樣本固定：使用專用夾具固定載玻片，防止觀察過程中滑動。
二、操作流程規范：從開機到關機的標準化步驟
開機與初始化
順序操作：先開顯微鏡主機電源，再啟動圖像采集系統（如相機、軟件）。
光源校準：
透射光顯微鏡：調整聚光鏡高度至物鏡后焦平面（可通過貝朗特實驗驗證）。
熒光顯微鏡：預熱汞燈/氙燈15分鐘，確保光輸出穩定。
調焦與觀察
低倍物鏡起手：先用4×或10×物鏡對光，避免高倍物鏡直接接觸樣本。
粗調焦限制：旋轉粗準焦螺旋時，需時刻觀察物鏡與樣本間距，防止碰撞（建議保留≥1mm安全距離）。
細調焦優化：切換至高倍物鏡后，僅使用細準焦螺旋調焦，避免粗調焦引發樣本漂移。
圖像采集與存儲
參數設置：
曝光時間：根據樣本亮度調整（通常10-500ms），避免過曝或欠曝。
白平衡：使用標準白卡校準，確保顏色還原準確。
數據管理：
圖像文件命名遵循“日期_樣本名_物鏡倍數”格式（如20250618_HeLa_40X）。
定期備份數據至專用服務器，避免本地存儲丟失。
關機與整理
光源關閉：先關顯微鏡主機電源，再拔掉電源插頭（熒光顯微鏡需待汞燈冷卻30分鐘后再關）。
物鏡歸位：將物鏡轉至“八”字位置，防止灰塵落入鏡筒。
防塵覆蓋：套上專用防塵罩，避免空氣中的顆粒物沉積。
三、維護保養規范：延長設備壽命的關鍵措施
日維護
清潔：
用洗耳球吹除物鏡、目鏡表面灰塵（禁用嘴吹，防止唾液腐蝕鏡片）。
清潔載物臺、調焦機構，去除殘留樣本或污漬。
功能檢查：驗證調焦、光源、物鏡轉換等功能正常。
周維護
光路校準：
使用激光校準儀檢查光路準直性（誤差應<0.1mrad）。
調整聚光鏡數值孔徑匹配物鏡（如100×物鏡需NA≥1.4）。
潤滑保養：對調焦機構、載物臺導軌涂抹顯微鏡專用潤滑脂。
年維護
專業檢修：
更換老化光源（LED光源壽命通常>20000小時，汞燈<300小時）。
檢測物鏡分辨率（使用星點板驗證，MTF>0.4為合格）。
性能驗證：
通過標準樣片（如USAF 1951分辨率板）校準系統分辨率。
測試圖像采集系統的線性度（相關系數R2>0.99為合格）。
四、安全注意事項：規避操作風險的核心原則
電氣安全
接地保護：確保顯微鏡電源插頭可靠接地，防止漏電風險。
電源適配：使用設備原裝電源適配器，避免電壓不穩損壞電路。
光學安全
激光防護：使用激光共聚焦顯微鏡時，B須佩戴激光防護眼鏡（波長匹配激光器輸出）。
紫外防護：熒光顯微鏡觀察紫外激發樣本時，需關閉室內照明，避免紫外光泄漏。
化學安全
樣本處理：使用有機溶劑（如二甲苯）清潔樣本時，需在通風櫥內操作。
廢液處置：染色廢液需按實驗室規定收集，避免隨意傾倒污染環境。
五、操作人員資質與培訓
資質要求
理論考核：通過顯微鏡原理、光路結構、安全規范等理論考試（≥80分合格）。
實操認證：完成樣本制備、調焦觀察、圖像采集等實操考核（由Z深工程師評估）。
持續培訓
新技術培訓：每年參加至少1次顯微鏡新技術培訓（如超分辨技術、AI圖像分析）。
安全演練：每半年參與1次實驗室安全演練（如化學泄漏、設備故障應急處理）。
