在生命科學、醫學診斷及材料檢測領域，光學顯微鏡是觀察微觀世界的基礎工具。然而，其制樣過程涉及生物樣本處理、化學試劑使用及精密光學系統操作，潛在風險不容忽視。本文從個人防護、樣本制備、設備操作到環境管理，系統梳理光學顯微鏡制樣的安全事項，助力實驗室構建規范化安全體系。
一、個人防護裝備（PPE）：分層防御風險
1. 生物樣本處理防護
生物安全柜操作：處理病原微生物或活體樣本時，B須在BSC-II級生物安全柜內操作，避免氣溶膠泄漏。
防護服與手套：穿戴一次性無粉乳膠手套及實驗服，處理高風險樣本（如結核桿菌）時升級至正壓防護服。
2. 化學試劑防護
防化眼鏡與面罩：使用甲醛、二甲苯等致癌試劑時，佩戴全封閉防化面罩，防止蒸汽吸入或液體飛濺。
通風櫥使用：在通風櫥內進行染色、脫蠟等步驟，確保有害氣體排放濃度<0.5ppm。
3. 物理損傷防護
防切割手套：操作載玻片或蓋玻片時，佩戴耐切割等級3級的手套，避免手部被玻璃碎片劃傷。
激光安全護目鏡：若設備配備激光模塊（如共聚焦顯微鏡），需佩戴對應波長的防護眼鏡。
二、樣本制備規范：從固定到封片的標準化流程
1. 生物樣本固定與染色
固定液選擇：
細胞樣本優先使用交聯劑（如多聚甲醛），避免使用劇毒的汞類固定劑。
動物組織樣本需在固定后充分清洗，殘留甲醛濃度<0.1%。
染色劑管理：
蘇木精-伊紅（H&E）染色劑需單獨存放，避免與酸性試劑混放引發爆炸風險。
2. 化學試劑配制與使用
濃度梯度控制：
梯度酒精脫水時，從70%逐步過渡至****，避免濃度突變導致樣本收縮破裂。
使用二甲苯透明化時，時間控制在5分鐘內，防止樣本過度硬化。
廢棄物處理：
染色廢液需用專用容器收集，標注“化學廢棄物”，交由專業機構處置。
3. 封片與存儲安全
中性樹膠使用：封片時在通風櫥內操作，避免吸入樹膠揮發物。
樣本存儲條件：
熒光樣本需避光保存于-20℃冰箱，防止熒光淬滅。
載玻片盒需標注樣本類型、制備日期及操作人信息。
三、設備操作安全：從光源到機械部件的風險管控
1. 光源系統安全
汞燈防護：
開啟汞燈后需等待15分鐘穩定期，避免頻繁開關縮短壽命。
更換汞燈時佩戴防紫外線手套，防止皮膚灼傷。
LED光源散熱：
連續使用LED光源>4小時時，確保設備散熱風扇正常運行，避免過熱保護停機。
2. 機械部件操作
載物臺移動限制：
手動調節載物臺時，避免粗暴操作導致物鏡碰撞樣本。
電動載物臺需設置軟件限位，防止行程超限。
物鏡清潔與保養：
使用專用鏡頭紙清潔物鏡，避免用酒精直接擦拭鍍膜層。
長期不用的物鏡需存放在干燥皿中，防止霉變。
四、環境與應急管理：構建安全實驗室生態
1. 工作區域規劃
分區管理：
設立“清潔區”（樣本制備）與“污染區”（染色、廢棄物處理），通過顏色標識區分。
防滑與防爆設計：
地面鋪設防靜電地膠，化學試劑存放區安裝防爆柜。
2. 應急物資配置
洗眼器與沖淋裝置：
在顯操作臺10秒步行距離內配置洗眼器，并定期檢查水流壓力（≥1.5L/min）。
化學灼傷急救包：
包含中和劑（如5%碳酸氫鈉溶液）、無菌紗布及操作指南。
3. 事故應急流程
化學試劑接觸皮膚：
立即用大量清水沖洗15分鐘，并涂抹對應的燒傷膏。
生物樣本污染：
封鎖現場并啟動紫外線消毒燈，通知生物安全專員處理。
五、維護與培訓：安全文化的長效機制
1. 定期維護計劃
每日清潔：
用氣槍清除設備內部粉塵，重點清理光源散熱孔及載物臺導軌。
年度深度保養：
拆解物鏡組，用異丙醇清洗內部鏡片，并重新校準光路。
2. 操作員認證體系
理論考核：
涵蓋設備原理、安全規程、應急處理等內容，合格線設為95分。
實操評估：
在導師監督下完成3種不同樣本（細胞涂片、組織切片、金屬顆粒）的制備，染色均勻度>90%。
六、實戰案例：安全漏洞的代價與改進
案例1：汞燈爆炸事故
原因：未等汞燈冷卻強行拆卸，導致燈管炸裂。
改進：
制定《汞燈操作SOP》，明確“冷卻30分鐘”強制等待時間。
加裝汞燈防護罩，緩沖爆炸沖擊波。
案例2：化學廢液誤混引發火災
原因：將含乙醇的廢液與含次氯酸鈉的廢液混合，產生氯仿爆炸。
改進：
實施“廢液分類投放”制度，設置紅（酸性）、藍（堿性）、黃（有機）三色廢液桶。
在廢液處理間安裝可燃氣體報警器。
結語：安全是顯微觀察的“隱形透鏡”
光學顯微鏡制樣的安全操作不僅關乎數據質量，更直接影響人員健康與設備壽命。通過個人防護、樣本規范、設備管控、環境管理四維防控，可系統性降低風險。對于實驗室管理者而言，定期開展安全培訓、更新防護裝備、優化操作流程，是構建安全文化的核心路徑。記住：每一次規范操作，都是對科研效率與實驗室安全的雙重保障。
